美国金钟连翘组培快繁技术的研究

美国金钟连翘为木犀科连翘属的半常绿灌木，是连翘和金钟花的杂交种，性状集中金钟和连翘优点，早春满枝金黄，艳丽可爱，生长期枝条拱形展开，尤以晚秋冬初翠绿欲滴，形成一道亮丽的风景线，近年来在园林中广为应用。下面介绍美国金钟连翘组培快繁技术的研究。

美国金钟连翘多以扦插法繁殖，存在繁殖率低、苗木质量差、不整齐等不利因素，极大地限制了这一优良品种在园林中的应用规模。利用组培快繁技术对美国金钟连翘进行快速繁殖，可在短期内生产出大量整齐、均匀的健壮植株，并有利于种质资源的保存、优良品种的应用与推广，以及为基因克隆和生产转基因植株做准备材料[2]。

1材料与方法

1.1材料

供试材料为从南京中山植物园引种的美国金钟连翘。

1.2方法

1.2.1外植体的处理。

选择生长健壮、洁净并且无病虫害、当年生长的植株。剪取带腋芽的茎段切成长1.5cm的切段，在流水下冲洗2~5h，用饱和漂白粉液浸泡25min，在超净工作台上用0.1%的HgCl2溶液浸泡5min，无菌水冲洗5次后接种。

1.2.2增殖培养。

在MS+NAA0.1mg/L的培养基中，分别加入0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.5mg/L的6-BA；在MS+6-BA1.0mg/L的培养基中，加入0.1mg/L的NAA、IBA和IAA，观察试管苗的生长和增殖情况。培养基含蔗糖30g/L、琼脂7g/L。每种培养基用于统计的样品为随机抽取15瓶，每瓶中只接1个外植体，增殖系数定义为每个外植体所产生新芽的个数。

1.2.3生根培养。

在1/2MS的培养基中，加入不同浓度的IBA、NAA和IAA，观察试管苗的生根情况。培养基含蔗糖15g/L、琼脂7g/L。每种培养基用于统计的样品为随机抽取20瓶，每瓶中只接1个丛生芽，统计生根率。

1.2.4培养条件。

培养温度25~28℃，光照11~12h/d，光强1000~1500Lx，培养基pH值5.9。

2结果与讨论

2.1增殖培养

将带节茎切段接种到不同浓度的6-BA的MS+NAA0.1mg/L培养基上，培养至第九天时在多数培养基上外植体节上有侧芽萌动，培养至第十七天时在一些培养基上茎两端切口处形成愈伤组织，培养至第三十六天时大多数培养基上有芽生成，第四十五天时统计产生的新芽数量，计算增殖系数，结果如图1所示。由图1可知，随着6-BA浓度的增大，试管苗的增殖系数表现为先上升后下降的趋势。当6-BA浓度为1.0mg/L时，试管苗的增殖系数为6.3，显著高于其他各浓度处理。

在MS+6-BA1.0mg/L的培养基中，分别加入0.1mg/L的NAA、IBA和IAA，统计试管苗的增殖系数，其结果如图2所示。图2表明，相同浓度的NAA、IBA和IAA对试管苗的增殖系数的影响不尽相同。其中NAA为0.1mg/L时试管苗增殖系数最大，显著高于IBA和IAA。综合图1和图2可知，美国金钟连翘试管苗增殖的最适培养基应为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

2.2生根培养

将培养在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的增殖苗切成单芽植株，接种到分别添加0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L的IBA、NAA和IAA的1/2MS培养基中，观察试管苗的生根情况，统计生根率，结果如图3所示。由图3可知，当激素浓度相同时，添加IAA显著有利于促进试管苗的生根；当IAA浓度为1.5mg/L，试管苗的生根系数最大，达98.7%。因此耕种帮建议最适合美国金钟连翘试管苗生根培养的培养基为1/2MS+IAA1.5mg/L。

2.3试管苗的移栽

试管苗在瓶内生根后，在自然光照和温度20~25℃的条件下炼苗20d左右，当苗高7~10cm、有4~5条白色长根时，从瓶内取出洗净培养基，然后移栽到蛭石中，每天浇Horland营养液，并加塑料袋保湿，10d后成活率达84.3%。定植于腐殖土中并移入温室栽培，最终成活率可达91.2%。