2017-10-12 02:35 作者:李先生
1材料与方法
1.1材料试剂与仪器
1.1.1供试菌株
沈阳棋盘山野生的蛹虫草菌株。
1.1.2培养基
马铃薯100g、葡萄糖10g、牛肉膏5g、KH2PO40.5g、MgSO40.25g、琼脂10g,加蒸馏水至500mL,煮沸使琼脂完全融化,高压蒸汽灭菌121℃,30min。
1.1.3试剂
75%酒精,无菌水。
1.1.4主要仪器
手提式压力蒸汽灭菌锅、分析天平、超净工作台、HPX-9082MBE数显电热培养箱,其他常用玻璃仪器等。
1.2试验方法
1.2.1不同的组织部位分离方法比较
(1)子实体分离法
在超净工作台上将虫草子实体用75%酒精浸泡1min,无菌水冲洗3次,再用小刀分别切取子实体顶端、中部、根部,然后接种到斜面培养基上,18℃恒温培养15d。观察不同组织部位对北虫草萌发天数、长势、满管时间的影响[1]。
(2)孢子分离法
上述方法洗涤得到的子实体,用小刀切取尖端,悬挂在三角瓶棉塞下端的不锈钢弯钩上,通过悬挂虫草子实体,使顶端朝下,散落下来的孢子落在培养基上,从而继续生长,并产生白色菌丝。在培养的前期,要保证室温不能过高,因此本试验在培养时,将三角瓶置于充满凉水的盆中,并需要每天换水,维持较低的水温。在18℃恒温培养5d后,无菌条件下取出子实体尖端,将三角瓶放回,继续培养10d[2]。
1.2.2不同的消毒方式比较
以子实体顶端为例,处理方法见表1。
接种到斜面培养基上,18℃恒温培养15d。观察不同消毒方式对北虫草萌发天数、长势、满管时间的影响。
1.2.3继代培养试验
挑选长势好的分离菌种,接种到玻璃瓶中,将玻璃瓶放入培养室培养。
2结果与分析
2.1组织分离法分离北虫草菌种的研究
2.1.1不同组织部位对北虫草萌发天数的影响
通过对同一株北虫草分别切取顶端、中端和根部,采用相同的消毒方式进行除菌。可以看出,在培养的最初阶段,在培养顶端和中端部位的试管中,北虫草两端均有白色菌丝生长,而在培养根部部位的试管中,没有白色菌丝生长(图1)。
2.1.2不同组织部位对北虫草长势的影响
匍匐型菌丝的有无可作为判定菌种优劣的依据,其量越多,菌种质量越优[3]。随着培养时间的延续,在培养3种不同北虫草部位的试管中,均产生了白色菌丝,长势上并没有出现差异。
2.1.3不同组织部位对满管时间的影响
经过若干天的培养,3种不同部位的北虫草菌丝体并未出现明显的满管现象。
2.1.4孢子分离法分离北虫草菌种的研究
孢子分离法培养前期如图2-A,培养2d后,培养基上已有少量的菌丝生成(图2-B),培养5d后,培养基上已经形成了大量的菌丝(图2-C)。此时,在无菌条件下取出子实体,继续培养10d。从萌发时间和长势上看,孢子分离法分离得到的菌株品质更优。
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