蔬菜农药残毒快速检测技术

　　

国《农药管理条例》中明确规定：“使用农药应当遵守国家有关农药安全、合理使用的规定，按照规定的用药量，用药次数，用药方法和安全间隔期施药，防止污染农副产品，剧毒、高毒农药不得用于防治卫生害虫，不得用于蔬菜、瓜果、茶叶和中草药材”。但一些农民不按规定，滥用农药。杀虫剂中70%多为有机磷农药，而在所有有机磷杀虫剂农药中，70%又多为剧毒或高毒农药，农药如果使用不当，不但药效不好，还会发生药害，污染环境，造****畜中毒。
　　如何让大家吃上放心的蔬菜呢？除了加强宣传，普及合理科学使用农药知识，对剧毒、高毒农药实行限制政策措施外，加强对市场上蔬菜农药残留的监控是非常重要的。
　　根据我国蔬菜生产相对分散的特点，酶抑制法(生化法)是一种简便、灵敏、快速、经济的检测方法，在较短的时间得到检测结果，又及时对市场上含残毒的蔬菜进行监控。
　　根据2002年1月28日发布，2002年6月1日实施的中华人民共和国国家标准GB/T18630-2002《蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯农药残留量的简易检测方法　酶抑制法Method for simple　determination of organophosphorus and carbamate pesticide residues in vegetables-Enzyme inhibition method》，现将农药快速检测—生化法介绍如下。
　　1、检测原理：根据有机磷和氨基甲酸脂类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒学原理，用在对农药残留的检测中。如果蔬菜的提取液中不含有机磷或氨基甲酸脂类农药残留或残留量较低，酶的活性就不被抑制，试验中加入的底物就被酶水解或少部分被水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色。反之，如果蔬菜的提取液中含有一定量的有机磷或氨基甲酸酯类农药，酶的活性就被抑制，试验中加入的底物就不能被酶水解，从而不显色或颜色变化很小，用分光光度计测定吸光值随时间的变化，计算出抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸脂类农药的残留情况。 　　即：乙酰胆碱脂酶+有机磷或氨基甲酸脂类农药→酶活性被抑制。
　　乙酰胆碱酯酶+样本，酶活性被抑制→样本中含有有机磷或氨基甲酸脂类农药；
　　酶活性正常→样本中不含有机磷或氨基甲酸脂类农药。反应过程式略。
　　以乙酰胆碱(Asch)做底物为例，在乙酰胆碱脂酶(AchE)的作用下乙酰胆碱(Asch)水解成硫代胆碱和乙酸。硫代胆碱与二硫双对硝基苯甲酸(DTNB)反应使反应液呈黄色，在分光光度计412纳米处有最大吸收峯，用比色法可测得酶的活性(用抑制率表示) 反应过程式略。
　　2、仪器
　　专用速测仪(410±3nm)或可见光分光光度计；电子天平(准确度0.1g)；微型样品混合器；台式培养箱；移液枪：10-100ul(可调)，1-5ml(可调)；配套玻璃仪器及其它配件。
　　3、试剂(从略)
　　4、检测过程
　　取2g样本(非叶菜类取4g)切碎，放入提取瓶内，加入20ml缓冲液，震荡1-2min，倒出提取液，静止3-5min；于平底小试管内加入50UL醉★,3ml样本提取液,50UL显色剂；于37-38℃下抑制30min，加入50UL底物★，混合后倒入比色杯中进行测定。
　　检测结果计算如下：
　　抑制率%=△Ac-△As/△As×100%
　　式中△Ac:对照组3min后与3min前吸光值之差；
　　△As样本3min后与3min前吸光值之差
　　5、检测结果判断标准
　　抑制率＜70%为阴性；
　　抑制率＞70%为阳性，表示蔬菜中含有机磷或氨基甲酸脂类农药残毒。呈阳性的样本至少要有两次以上重复检测，方可定论。
　　6、采样要求
　　叶菜、果菜、豆菜、瓜菜(除胡萝卜、韭菜、茭白、蘑菇)随机抽取各部位蔬菜，每种样本至少取0.5-1公斤左右，并尽量具有代表性。抽检的样本要详细记录，如蔬菜种类、抽检地点、抽检时间，蔬菜来源、批发商等。
　　7、酶的要求，假阳性的产生，抑制率出现负值（从略） 　　

本方法的最低检出浓度见次表