金线莲种子种植技术（金线莲种子发芽技术）

　　怎样解决金线莲种子自然萌发成苗效率低的技术问题？

　　金线莲属于兰科开唇兰属植物，为地生兰。金线莲不仅药用价值高，在民间素有“药王”、“金草”等美誉，同时也是一种极具观赏价值的室内观赏珍品。金线莲种子发育不全，没有胚乳，自然条件下很难独立萌发成苗，再加上近年自然环境遭受严重破坏，鸟、虫、蛇等为害，人工的过度挖掘，使野生金线莲濒临灭绝。

　　在这种情况下，金线莲的人工培养技术显得尤为重要，而人工培养条件下，种子萌发成苗仍然是整个培养过程的技术瓶颈之一，由于缺乏有效的诱导方法，因此现有技术中金线莲种子的萌发率较低。尽管有研究者进行了大量尝试，但目前仍未取得有效的萌发促进方法，严重制约了金线莲培养技术的规模化应用。

　　1 内生真菌的获得

　　将野生金线莲的根采下，自来水洗净泥沙，肥皂水浸泡10-20min，冲洗干净,75%酒精表面消毒30s,0.1%升汞消毒5min，最后无菌水冲洗5遍。将每条根剪成若干0.5-1.0cm的根段，平放在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA平板培养基，事先灭菌，分装在无菌的培养皿中)上，每个培养皿接5个根段。对照组为最后一次的清洗液，涂在培养皿中，接种40个培养皿，封口膜封好放于28℃恒温培养箱中进行暗培养。

　　待菌长出后，通过划线的方法进行纯化。在超净工作台上，用接种针轻轻挑起少许菌丝，在PDA平板培养基上划斜线，随后用封口膜封好培养皿。观察菌产生的菌落形态，合并相同形态的菌，将分离出的纯菌继续用PDA平板培养基培养，纯菌接种于试管中于-20℃冰箱中保存。

　　待金线莲种子成熟时，将真菌从冰箱中取出，用接种针逐一挑出真菌接种在PDA培养基上，放于28℃恒温培养箱中进行暗培养。培养7-lOd后进行共生培养研究。

　　2.真菌与种子共生培养

　　将发酵好的牛粪和木屑基质，加入少量蒸馏水，用手握基质湿润又捏不出水即可，分装在若干培养瓶中，高温高压灭菌冷却，备用。

　　按照常规兰科种子消毒方法对金线莲茹果进行消毒，用解剖刀将茹果划开，将种子抖落在灭好菌的牛粪和木屑基质中。分别在PDA培养基上截取lcmX 1cm真菌小块，放于播完种的牛粪和木屑基质中，每种真菌在2种基质中各接种3瓶。空白对照只播种不接种真菌。将接完菌和种子的培养瓶放于28℃黑暗条件下培养1周，随后培养条件为光照时间12h/d,光照强度为2000-25001x，培养温度26±2 ℃，观察种子萌发情况。