如何分离蜜环菌菌种？

（１）分离材料的选择与采集 ①子实体 在晚秋季节，潮湿多雨的地区，有大量蜜环菌子实 体长出地面，采集新鲜、形态完整、生长健壮、无病虫危害的子实体 作为分离材料。 可用子实体的组织或孢子进行分离，用作孢子分 第五章 天麻栽培技术离的子实体，应选择较成熟、正在释放孢子的子实体。 ②天麻块茎 ９ ～ １０ 月份新生麻将要进入休眠期，部分箭麻 和白麻表面感染了蜜环菌索，选择带有红色菌索的块茎进行分离。 在正常情况下，蜜环菌索只能侵入新生麻表皮细胞，附着在表面， 因此应选择有蜜环菌索的部位，切取天麻表层细胞进行组织分离。 白麻栽种后生长出新生麻，如果新生麻已接蜜环菌，说明该蜜环菌 与天麻具有良好的亲和性，此材料为最好的分离材料；如果新生麻 细长，母麻体表无蜜环菌索侵染，说明母麻未和蜜环菌建立共生关 系，不宜作为分离材料。 ③菌索 蜜环菌在自然界中主要以菌索的形式分布生长在多 种树木的根部及枯树根上，也有一少部分寄生在活树根上。 幼嫩 的菌索棕红色，具有白色生长点，剥去外壳，内部充满白色疏松菌 丝，靠近白色生长点的幼嫩部位，菌丝再生力和生活力都很强，为 最好的分离材料。 在野外采挖野生蜜环菌菌索时，不宜与树根、树 桩分开。 为了提高分离成功率，可将附着菌索的树根埋入潮湿的 沙土中，浇水保湿，在适宜条件下，发出新菌索后，采摘白色生长点 及红色幼嫩的菌索进行分离，提高分离的成功率。 老化的菌索呈 黑色和黑褐色，鞘内菌丝为黄色，干枯状，有的成空壳，不适宜作分 离材料。 （２）分离方法和技术 ①组织分离 是利用蜜环菌子实体、菌索及带菌索的天麻块 茎进行分离而获得蜜环菌菌种的方法。 这种方法分离得到的蜜环 菌菌种生命力强，菌丝生长快，得到的菌种纯，因此，该种分离技术 应用较广。 具体方法：选择品质优良、处于生长旺盛的蜜环菌子实体，先 用清水洗净黏附的泥土、杂物，放于接种室中的无菌器皿中，用表 面消毒剂（如 ７５％酒精，０? １％升汞溶液）浸泡 ０? ５ ～ １ 分钟，取出样 品用无菌水冲洗数次，去掉残留消毒液。 用灭菌滤纸吸去黏附的 ·６６· 水分，用无菌刀将子实体的菌盖截取 ０? ５ 厘米２ 的小块，用无菌镊 子将其移植在 ＰＤＡ 平板培养基上即可。 在 ２５℃ 恒温条件下培养 ７ ～ １０ 天，就可见有少量菌丝和棕红色的菌索出现。 将菌索及带菌索的天麻块茎先用清水洗净黏附的泥土，然后 切取所需要的部分组织，用 ７５％ 酒精、０? １％ 升汞溶液分别浸泡 ０? ５ ～ １ 分钟，无菌水冲洗数次，去掉残留消毒液，置于无菌培养皿 中。 将菌索或天麻块茎组织剪成小段或小块，放在青霉素溶液中 浸片刻，用灭菌滤纸吸去黏附的水分，将组织块置于预先准备好的 平板培养基上。 每皿 ３ ～ ４ 块。 在 ２５℃恒温条件下培养 ３ 天左右， 在接种点处开始发出少许绒毛状白色菌丝，很快转为白粉色，７ 天 以后开始长出菌索。 ②孢子分离 是利用子实体成熟后散出的孢子在适宜的培养 基上萌发，长成菌丝而获得纯菌种的方法。 具体方法：用 ７５％酒精对菌盖表面及菌柄部分进行消毒，消 毒后菌褶朝下插在孢子收集装置的支持架上。 将支持架放在无菌 培养皿中，然后用大烧杯罩住以收集孢子。 所有采集装置和用具 需先灭菌，操作时需要在无菌条件下进行，以保证收集孢子的纯洁 度。 待孢子落入培养皿内，用无菌水制成孢子悬浮液，经过逐级稀 释后使孢子充分散开，再用无菌吸管吸取后接种在 ＰＤＡ 平板培养 基上。 在 ２５℃恒温条件下培养 ３ 天左右，开始发出少许白色菌丝 体，挑取培养皿内的菌丝移植在斜面培养基上，继续培养数日即可 发出菌索。