(1)无菌室和分离用器具的灭菌和消毒 分离蜜环菌菌种的 操作过程,应该在很清洁的条件下严格按照无菌操作技术进行,无 菌室、无菌箱或洁净工作台都应保持清洁,必要时可用 0? 1%升汞 溶液或 70%乙醇擦拭工作台。 微生物一般都是附着在尘埃上、悬 浮于空气中,可在室内喷雾或煮沸水的方法,使空气中水汽饱和, 尘埃与水滴同时降落,除去空气中的微生物。 分离时所用的培养 皿、刀剪、接种铲等用具及工作人员的工作服都应进行无菌处理, 工作人员操作时不能在操作间走动,防止带来杂菌。 (2)消毒液的配制 ①无菌水 即高压灭菌后的自来水。 将适量的自来水装入三 角瓶中,塞好棉塞,然后进行高压灭菌,装入水量不宜太多,防止高 压灭菌时弄湿棉塞。 无菌水不应保存过长时间,防止污染。 ②常用的消毒液 0? 1%升汞溶液、漂白粉、70%酒精溶液。 此外,5%福尔马林、3%过氧化氢、2%高锰酸钾等都可用做表面消 毒,处理时间和浓度因材料不同而异,处理后都应用无菌水冲洗。 (3)排除细菌污染 细菌污染是分离真菌的大敌,目前抑制 细菌生长有效的方法是在培养基中加入适当的抗生素。 加金霉素 (30 微克 / 毫升)可抑制多数细菌生长,加青霉素(2 微克 / 毫升)可 抑制革兰氏阳性细菌生长,加多黏菌素 B(0? 5 微克 / 毫升)可抑制 革兰氏阴性细菌生长,加链霉素(40 微克 / 毫升)和氯霉素(50 微 克 / 毫升)可以抑制大部分细菌生长,除氯霉素可在制作培养基时 灭菌前加入外,其他抗生素都应在培养基灭菌后冷却至 45℃ 左右 时再加入。 此外,可调节培养基的 pH 值,酸性培养基对大部分细 菌都有抑制作用,而并不影响真菌生长。