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如何进行蜜环菌菌种培养与生产?

2024-10-02 17:21 作者:李先生  

蜜环菌菌种生产是采用严格的无菌操作技术、大量培养繁殖 菌种的过程。 用于生产的蜜环菌菌种必须经过母种、原种、栽培种 等三级菌种生产过程。 这三级菌种生产又需经过菌种转接、扩大 培养到所需要的数量,方可投入大面积生产。 (1)接种 是将所需要的蜜环菌菌种移植到适宜其繁殖生长 的培养基上的操作。 ①蜜环菌母种接种 即为原始菌种,也称为一级菌种,是从蜜 环菌孢子分离或组织分离所获得的纯菌丝体。 蜜环菌母种的扩大 培养也称为继代培养,或称移植、转接、转管等。 自行分离或引种 的原始菌种一般数量很少,不直接用作培养原种,需进行扩大转 接,一部分用来继续转接母种,一部分用于保藏。 从保藏条件下转 管活化扩大培养的菌种,也为一级母种,可直接转入原种生产。 母 种培养一般常用玻璃试管培养基培养,便于观察、鉴别,且易于 保藏。 ②蜜环菌原种接种 蜜环菌原种也称为二级菌种,一般用玻 璃广口瓶或罐头瓶生产。 蜜环菌原种的接种过程也要严格遵守无 菌操作规程。 用右手拔去灭过菌培养基广口瓶的棉塞,将瓶固定 在瓶架上,并靠近火焰 1 厘米左右的无菌区,取母种试管,酒精擦 拭管壁,去棉塞后在火焰上烧灼管口,接种铲经过火焰火苗,迅速 插入试管内,冷却后取 2 厘米大小一块母种,送入菌种瓶内,固定 在培养基的接种孔中。 母种为液体时,可直接将培养好的菌液倒 入原种瓶。 1 瓶液体菌种可接 8 ~ 15 瓶原种。 接种完毕用牛皮纸 ·70· 包好,扎上橡皮圈,即可移入培养室。 ③生产种接种 生产种也称为三级菌种,一般用玻璃广口瓶、 塑料袋生产。 生产种的接种过程,操作者也应严格遵照无菌操作 的程序进行,待培养基瓶(袋)高压灭菌冷却后,即可移入接种间。 选择无杂菌污染、菌丝已长满菌种瓶的原种,用酒精棉球擦拭瓶壁 和瓶口外,揭去牛皮纸,棉塞的瓶外部分在火焰上燎烧,杀死可能 沾染的杂菌,然后拔去棉塞,点燃酒精棉球燎烧瓶口内壁,将菌种 固定到接种架上,用火焰燎烧瓶口。 接种时用火焰上灭过菌的接 种铲,先将菌种表面老化的菌皮或已分化出的子实体原基去掉,然 后摇动原种,使其松动后并分成小块,迅速铲出一小块原种接入待 接瓶内培养基中间,稍压实。 火焰燎烧瓶口和棉塞后盖住瓶口,包 好封口纸。 用塑料袋生产三级菌种,袋不能直立、不宜火燎,接种 较困难,除接种室应严格灭菌外,接种后可将培养袋口下部在石灰 浆中浸泡片刻,起到密封的作用,接种后竖放在培养架上,不宜挤 压和翻动。 如果发现原种棉塞潮湿怀疑感染有霉菌,虽未发现培养基和 瓶内壁有杂菌菌落,也应弃之不用,如原种缺乏仍需用其扩大接种 时,则应用纸包好棉塞和瓶口,点燃酒精棉球擦拭和燎烧瓶壁与瓶 底,用铁器击穿瓶底,然后固定于接种架上,接种时只用从瓶底到 瓶壁 2 / 3 的原种,瓶口部分不用。 如果原种未长满菌种瓶,为争取 时间也可用长满半瓶的原种。 接种完毕,原种瓶要留一薄层菌种, 然后用酒精棉球擦拭瓶口内壁和外壁,棉塞燎烧后盖好菌种瓶,包 牛皮纸后移入培养室。 由于半瓶原种菌种瓶内空气较多,原种很 快会长满,又可用做原种转接。 (2)菌种培养 接种后的各级菌种都应放在适宜其生长的条 件下进行培养。 蜜环菌母种一般在恒温箱中 25℃ 条件下培养。 一般 7 天左右菌索长满培养基,即可转接原种。 原种和生产种数量较大,接种后立即放入培养室的培养架上。 ·71· 第五章 天麻栽培技术菌种培养条件主要应对温度、湿度、光线和空气进行调节,一般蜜 环菌菌丝体生长阶段不需要光线,而培养基在拌料装瓶(袋)时已 有一定的水分,故菌丝体培养阶段主要应控制好温度和通气条件。 ①温度控制 温度影响菌索生长的速度、菌丝对培养基分解 能力的强弱、菌丝分泌酶的活性高低和菌索长得强壮程度。 在菌 种生产过程中,培养温度太高会造成菌种早衰,太低会导致菌索长 得缓慢,而延长生产周期。 因此,调节保持适宜的温度是一项重要 的工作。 蜜环菌应在 25℃左右条件下生长。 ②通气条件 蜜环菌是好气性真菌,培养时应注意通风透气。 除装瓶(袋)时不宜过满,上部留出一定的空间,有利于生长外,在 菌种培养室内要有适当的通风窗,或有排风扇等机械设备进行通 风。 但通风和保温往往有矛盾。 尤其是冬季寒冷季节,通风会降 低培养室温度,为了能保持室内有一定的通气量,培养架不宜过 挤,菌种瓶(袋)摆放疏松些,同时可利用中午温度较高时,适当通 气,以利于菌种生长。 ③湿度调节 菌种培养是在固定容器内生长菌丝体,只要培 养基水分适宜,培养室的湿度就很容易调控。 主要依据自然条件, 防止湿度过大杂菌滋生,可在室内定期撒生石灰吸潮,加强通风除 湿。 在培养后期,若湿度不够,可在培养室内喷水增大湿度。 ④光线的调控 一般蜜环菌在菌丝体生长阶段,不需要光照, 需要有遮光设备,如将门窗挂上帘子。 控制好培养室的温度、湿度、光照等环境条件,对蜜环菌的培 养与生产是很重要的。   
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