叶片培养

叶片培养可能是产生原球茎最有希望的方法，可取带腋芽的花梗，用水冲洗后，置于10％漂白粉溶液中，表面灭菌20分钟，除去苞叶，再在5％漂白液中灭菌3分钟，用无菌水冲洗干净，接种到培养基上培养，置于室温23～24℃和每日16小时500勒克斯光照条件下诱导产生原球茎后，进而分化出叶片。培养基可用VW，附加CM20％、蔗糖2％～3％、琼脂1％的培养基。或者不用CM而加6-苄基嘌呤5．0毫克／升也可以。然后取其展开叶片最上部先端、中央或基部，切成6～8毫米大小，接种于Kyoto改良培养基，加复合肥料3500毫克／升、肌醇100毫克／升、烟酸1毫克／升、盐酸硫胺素1毫克／升、萘乙酸1毫克／升、腺嘌呤10毫克／升、BA10毫克／升，蔗糖改为20克／升，琼脂10克／升，置于25C恒温和每日16小时500勒克斯光照条件下培养，约经40～60天后即可得到原球茎，再经继代培养，即可获得原球状的球状体。继代培养既可用Kyoto培养基进行固体培养，也可用VW培养基加20％CM，并除去蔗糖进行液体振荡培养。形成的原球茎球状体只需在简单的培养基上进行静置培养，2～3个月后萌芽出叶，再转到添加10％香蕉汁的Kyoto培养基上，经数月后即可得到可移植的大苗。