阿维菌素制备方法

 

    阿维菌素制备方法

    产生菌 由Streptomyces avermitills所产生。其为链霉菌中的一个新种，属灰色链霉菌（与其类似的melbeycin的产生菌则为吸水链霉菌）。

    形态为气生菌丝分枝，孢子一般在燕麦琼脂、甘油、天冬素、无机盐、淀粉及蛋清琼脂上出现。经电子显微镜观察，其孢子丝开始为紧密螺旋，而后期逐渐松开。孢子链上孢子一般超过15个，呈圆至椭圆状，表面光滑。

    菌种的选育十分重要，不同的Avermectin的产生菌种使发酵液各组分的含量有所不同，选用新的高产菌种不仅提高Avermectin的总单位，还使B1组分的比例明显提高。

    菌种的保存 Avermectin产生菌在YMS斜面上（酵母膏4.0g、麦芽汁10.0g、可溶性淀粉4.0g、琼脂20.0g、水1000mL、pH=7.4)生长，再将孢子置于20%的甘油水溶液中，于-30℃保存。

    种子制备 通常可采用两种培养基，在1000mL水中的成分如下。

    A：Cerelose 1.0g、可溶性淀粉10.0g、牛肉膏3.0g、Ardamine PH 5.0g、N-Z-Amine E 5.0g、MgSO4·7H2O 0.05g、KH2PO4 0.182g、Na2HPO4 0.190g、CaCO3 0.5g、pH=7.0。

    B:乳糖20.0g、distillers' Solubles 15g、Ardamine PH 5.0g, pH=7.0。将甘油孢子贮藏液接种在上述种子培养液中，于28℃培养1～2d后再接种到发酵培养基中。接种量通常为3%～5%。

    生物合成 生物合成可采用下列发酵培养基。

    A：Amidax 40g、distillers' Solubles 7g、Ardamine PH 5g、CoCl2·6H2O 0.05g、水1000mL，pH=7.3。

    B:Cerelose 45g、Prepionlzed milk nutrient 24g、Ardamine PH 2.5g、聚乙二醇P-2000 2.5mL、水1000mL,pH=7.0。

    研究表明，Avermectin的产生量与下列因素有关：①菌种。菌种选育不仅可提高微生物产生的发酵单位，而且能改变各组分的比便，由此提高所需组分含量，据报道，加入Slnefungin及S-adenosyl methione等甲基转移酶抑制剂也可改变产物中B和A的比例；

    菌种形态应选择菌丝丰满的菌种进行发酵（P.A.McCann所用培养基为糊精0.4%、肉膏1%、酵母0.4%、琼脂2%,pH=7.0)。②C/N比。对产量和组分影响甚大。③消泡剂。聚乙二醇是较好的消泡剂，它不仅可提高发酵单位，且可抑制发酵过程中一种橙黄色蜡状物的产生。④搅拌。对发酵效果影响较大，由于菌丝体对叶轮剪切较为敏感，故采用水翼轮式搅拌装置能改善供氧，提高产量。⑤无机盐。其他各种无机盐对发酵无有利的影响。